Rapid purification of Bio-Molecules

1. Size Exclusion Chrpmatography (SEC, 혹은 gel filtration) 은 수용액의 분자들을 크기에 따라 분리하는 크로마토 그래피 정제 방법입니다. 일반적으로, 이 방법은 DNA, oligonucleotide, 단백질, 항체, 다른 중합체와 같은 대량의 수용성 생화합물에 적합합니다.

2. Applichem Panreac은 ready-to-use 형태의 gravity flow, spin column, FPLC에 사용 가능한 칼럼을 판매하고 있으며, 모든 제품들은AppliXchange로 prepacking 되어 있습니다. 이 제품은 감도가 높고, 선명도가 높으며, 화학적으로 안정합니다. AppliXchange-G25M으로 정제된 분자물질은 크기에 따라 분리됩니다. 정제될 물질과 gel matrix의 화학적 상호작용은 무시할 정도이며 흡수되거나 matrix에 결합되는 양은 극미하거나 거의 없다고 판단될 정도로 적습니다. 버퍼와 pH가 선명도에 미치는 영향은 최소한이므로, 정제가 진행되는 동안 버퍼의 조건과 pH 값과 온도는 칼럼의 성분이 아니라 정제될 물질에 초점을 둡니다. 필수적인 조-효소 (cofactor)들이나 단백질의 기능이나 안정성에 필요한 이온은 정제과정에 크게 영향을 미치지 않으므로 자연스럽게 elution되는 물질에 포함됩니다. AppliXchange-G25M이 분리하는 크기는 10kDa 단백질과 10bp 핵산이며 정제된 물질은 AppliXchange-G25M에 희석되지 않으므로 손실이 적습니다.

3. Panreac Applichem의 size Exclusion chromatography는 (1) Ready-to-use gravity columns, (2) Spin columns, (3) Matrix substances 형태로 나오고 있습니다.

DextraSEC와 DextraSEP 는 ready-to-use 형태의 gel filtration 칼럼으로 다양한 크기와 형태로 사용 가능해서 desalting 과정이나 buffer 교환을 간편하게 할 수 있습니다.

 

4. 장점

1) 모든 샘플 사이즈에서 사용 가능합니다.

2) multiwall plate 로도 확장해서 사용 가능합니다.

3) 일반적인 elution buffer로 전처리된 spin column 형태로 제공되므로 Equilibration 및 washing 시간이 확연하게 단축됩니다.

4) 90% 이상의 회수율을 보이는 빠르고 경제적인 정제 방법입니다.

5) 다양한 샘플 볼륨에 적용 가능한 편리함 (10ul – 50ml)

 

 

FAQ (Frequently Asked Questions)

1. G50과 G25의 차이점은 무엇인가요?

제품의 25 숫자는 매트릭스의 “재 사용에 필요한 수분량”을 의미합니다. “25”단계는 건조된 매트릭스는 그 무게보다 2.5배의 물을 녹여서 사용해야 한다는 것을 의미합니다. (AppliXchange 1g 은 수분 2.5g을 흡수할 수 있습니다.) 동일하게 “50” 단계는 5g의 수분 필요량을 의미합니다. Swelling 숫자가 높을수록 pore size가 더 큽니다. Pore size은 size-exclusion cut-off를 결정합니다.

2. “Cut-off : 5kD/10bp”가 의미하는 것은 무엇인가요?

Cut-off는 칼럼에 남아있는 최대 분자량 크기를 의미합니다. 5kDa의 size exclusion cut-off는 matrix pore에 남아 있는 분자들의 최소 사이즈는 5kDa이고 그 이상되는 분자들은 matrix 밖으로 흘려 내렸음을 의미합니다.

3. 왜 다른 사이즈의 particle을 제공하나요?

Particle size나 bead size는 matrix의 분리 범위나 cut-off 특성과 관련있지는 않습니다, 그러나 유속과는 관계가 있습니다. 작은 particle은matrix를 더 안정적으로 하고 centrifuge나 vacuum에 적합합니다. 반면에 큰 particle size는 중력을 이용한 칼럼을 사용할 때 충분한 유속을 사용할 수 있습니다.